E. coli ATCC 25922 -Blank E. coli ATCC 25922 - 시료 # 1: 항균처리전
E. coli ATCC 25922-시료 # 2:항균처리후
(제지상태)
E. coli ATCC 25922-시료 # 2-1:항균처리후
(환경 처리후)
S. aureus ATCC 6538 - Blank
S. aureus ATCC 6538 - 시료 # 1:항균 처리전
S. aureus ATCC 6538 - 시료 # 2:항균 처리후
(제지상태)
S. aureus ATCC 6538 - 시료 # 2-1:항균 처리후
(환경 처리후)
K. pneumoniae ATCC 4352 - Blank
K. pneumoniae ATCC 4352
- 시료 # 1:항균 처리전
K. pneumoniae ATCC 4352
- 시료 # 2:항균 처리후(제지상태)
K. pneumoniae ATCC 4352
- 시료 # 2-1:항균 처리후(환경 처리후)
B. sutilis ATCC 6633 - Blank
B. sutilis ATCC 6633 - 시료 # 1:항균 처리전
B. sutilis ATCC 6633 - 시료 # 2:항균 처리후
(제지상태)
B. sutilis ATCC 6633 - 시료 # 2-1:항균 처리후
(환경 처리후)
1. 제목
한균제를 처리한 "부직포"의 항균 성능 시험.

2. 목적
제시된 시료를 "3."항의 사용 공시 균주에 대한 항균 성능 시험을 실시하고, 항균 능력을 알아보는데 그 목적이 있다.

3. 사용공시균주
대장균: Escherichia coli ATCC 25922
황색포도상구균: Staphylococcus aureus ATCC 6538
폐렴구균: Klebsiella pneumoniae ATCC 4352
고초균: Bacillus subtilis ATCC 6633

4. 배지 및 시약
(1) 뉴트리언트(Nutrient)배지
펩톤 (BACTO-Peptone Ehsms Thiotone)5g과 쇠고기 추출물(Beef Extract)3g을 증류수 1,000ml에 녹인후 0.1 M NaOH로 pH를 6.8±0.2 (25℃)로 조정한 다음 고압 멸균기에 1,055 g/㎠의 증기압력과 120±2℃에서 20분간 멸균하였다. 뉴트리언트(Nutrient)한천배지를 조제하는 경우는 한천 15g을 첨가하여 멸균하였다.

(2) 생리식염수
Nacl 5g을 증류수 1,000ml에 용해한 후, 고압 멸균기에 1,055g/의 증기압력과 120±2℃에서 20분간 멸균하여 사용하였다.

(3) 중화용액
NaCl 5g과 비어온 계면활성제(Tween 80) 2g을 증류수 1,000ml에 용해한 후, 고압 멸균기에 1,055g/의 증기압력과 12±2℃에서 20분간 멸균하였다.

5. 시험방법 (KS K0693-2001)
(1) 원리
시험편과 대조편을 시험균주로 접종시킨 후 일정시간동안 배양한 다음, 중화용액을 사용하여 배양된 세균을 추출시킨다. 이 액체 속에 존재하는 세균의 수가 측정되면, 항균성이 있는 시험편에서의 세균 감소율(정균율)이 계산된다. 즉, 이것은 직물의항균성의 정도를 정량적으로 나타내 준 것이다.

(2) 공시균의 배양 및 보존
백금이를 사용하여 소장중인 균주로부터 10ml의 뉴트리언트 사면 한천배지에 이식하고 37±1℃에서 24~46시간 배양한 다음 5~10℃에보존하고 한 달에 한번 계대 배양하면서 균주의 발육상태 및 이상유무를 확인하였다.

(3)접종원 준비
접종원 준비를 위하여 보존된 균주를 뉴트리언트 배지 20ml이 담긴 100ml삼각 플라스크에 접종하여 37±1℃에서 18~24시간 동안 진탕 배양하였다. 이렇ㄱ 배양된 균액을 흡관광도계를 이용하여 660nm에서 O.D.(Optical density)값을 측정하여 생균수를 계산하고, 이것을 20배 희석한 뉴트리언트 배지로 1±0.3 x 10**5 개/ ml이 되도록 조제한 균액 0.2ml을 접종원으로 하였다.

(4) 시험편 및 대조편의 준비
시험편 및 대조편을 0.4g준비하여 나사식 뚜껑을 가진 약30ml들이의 유리용기안에 시험편을 넣고, 각각 대조군 6 검체, 시험편 3검체를 준비하였다. 한 용기에 넣는 시험편 및 대조편은 접종원을 흡수할 수 있고 유리용기 안에 유동하는 액체가 없도록 주의하였다.
주: 대조편 6검체 가운데 3검체는 집종직후의 생균수 측정용으로, 나머지 3검체는 배양시험 후 생균수 측정에 이용한다.

(5) 대조편
일반적으로 시험편과 섬유의 종류 및 직물의 구조는 같으나, 항균 가공을 하지 않는 직물로부터 채취한 것을 대조편을 하며, 항균가공을 하지 않은 직물이 준비되지 않은 경우는 KS K0905(1996년판)에 규정된 표준포(면포)를 이용하여 대조수단으로 하였다.

(6) 환경 처리 조건
온도 30℃/습도 90%RH와 온돈 60℃/습도 90%RH를 각 12시간씩 1cycle로 하며, 5cycle을 반복 실시한다.

(7) 시험편 및 대조편의 접종
접종원을 0.2ml을 취하여, 각 유리용기에 있는 시험편 및 대조편위에 골고루 살포되도록 주의해서 접종하였다. 접종한 후에 건조를 막기 위해서 뚜껑을 잠구었다.
비고: 습윤이 잘 되지 않은 직물인 경우 비이온 계면활성제 (0.05%)를 첨가한 접종균을 사용한다.

(8) 배양 시험
시험균액을 접종한 대조편 3검체, 시험편 3검체가 담긴 유리용기를 37±1℃에서 18±1시간 배양하였다.

(9) 접종후 즉시 균액 추출
접종후 가능한 한 빨리 접종된 대조편을 담고 있는 유리 용기에 0℃의 중화용액 20ml을 넣고 심하게 흔들어 준 다음 각 검체로부터 균액을 추출한 후 생리식염수를 이용하여 단계적으로 희석하였다. 각각 희석애 1.0ml을 취하여 페트리 디쉬(Petri dish)에 넣은 다음 45℃로 유지된 뉴트리언트 한천배지(Nutrient agar)약 15ml을 부어 골고루 혼합한 후 실온에서 고화시켰다.

(10) 일정 접촉시간 후 균액 추출
18시간 배양후 대조편 및 시험편을 담고 있는 유리용기에 0℃의 중화용액 20ml을 넣고 심하게 흔들어 준 다음 각 검체로부터 균액을 추출한 후 생리식염수를 이용하여 각각 단계적으로 희석하였다. 각 희석액으로부터 1.0ml을 페리디쉬(Petri dish)에 넣고 45℃로 유지된 뉴트리언트 한천배지(Nutrient agar)약 15ml을 부어 골고루 혼합한 후 실온에서 고화시켰다.

(11) 모든 평판 배지를 37±1℃에서 24시간 동안 배양한 후 생균수를 계수하고 균 감소율(정균율)을 계산하였다.

6. 결과의 평가
시험편에 의한 균 감소율 (정균율)은 다음과 같은 식에 의하여 계산하였다.


7. 시험결과